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人工牛黄培育、体外培植牛黄技术工艺专利文献资料


1、ConABP对牛黄成核与核生长的影响

牛黄是一种珍贵的中药材,为众多著名中成药的重要原料之一。由于天然牛黄产量极少,人工牛黄药理作用远远不如天然牛黄,因此市场上的牛黄一直处于供不应求的状态。国内许多研究人员转向人工培植牛黄的研究,但是主要集中在如何提高其产量而忽视了对牛黄形成机理的研究,这就导致人工培植牛黄的质和量仍然不能满足市场的需求。本课题组利用电泳技术、层析技术以及间接免疫荧光的方法研究了胆汁中蛋白质在牛黄形成过程中的作用。为了进一步研究牛黄形成的机理,本试验利用亲和层析技术从牛胆汁中提取伴刀豆球蛋白结合蛋白(ConABP),然后向成核性牛胆汁(新鲜胆汁过滤消毒后与菌液按体积60:1混合即为成核性牛胆汁)中添加观察其体外促成核效应;利用间接免疫荧光染色法研究细菌和ConABP在牛黄颗粒中的参与及其分布情况,以揭示ConABP在牛黄形成过程中的作用。试验一耐胆汁大肠杆菌的驯化及胆汁蛋白质电泳分析..................共57页

2、β-G酶活性不同的大肠杆菌对体外培养植牛黄产量与质量的影响

测定了在不同条件下埃希氏大肠杆菌产生的β-G酶的活性,确定该酶发挥作用的最适条件;试验二测定了不同血清型的埃希氏大肠杆菌产生的β-G酶的活性,作为选择牛黄菌种的指标之一;试验三利用屠宰胆汁测定了五种不同血清型埃希氏大肠杆菌在一定条件下将结合胆红素(CB)转化为游离胆红素(UCB)的效率;试验四结合上述指标将两种不同血清型的菌种等量组合,测定其β-G酶的活性、结合胆红素的转化率、体外培植牛黄产量与质量,以及胆酸(CA)含量,从而确定植黄菌种的最佳组合。主要结果如下:试验一 大肠杆菌β-G酶活性影响因素的测定本试验主要探讨了温度、pH值、Ca2+、乙二醇等因素对β-G酶活性的影响。结果表明:温度升高可显著提高该酶的活性(P0.01),且在55℃时,其活性比在37℃提高近4.1倍;该酶的最适pH值为7.0;Ca2+在0.5mMol/L-10mMol/L浓度范围内对该酶具有激活作用且与浓度成正比,在10mMol/L时其激活..................共55页

3、大肠杆菌和ConABP对牛黄成核与核生长的影响

天然牛黄产量极少,人工配制的牛黄其药理作用远不如天然牛黄,国内在牛体内、外成功培植了天然牛黄,但其质和量一直不是非常稳定,主要原因是人们集中在如何提高其产量而忽视了对牛黄形成机理的研究。我们通过牛黄发生器内成黄实验研究了大肠杆菌、破碎菌体、灭活β-G酶的破碎菌体和ConABP对牛黄形成的作用,动态观察了胆汁主要成分在牛黄形成过程中的变化和胆汁的成黄规律。本试验包括以下三部分: 一、大肠杆菌和破碎的大肠杆菌对牛黄成核与核生长的影响 耐胆汁大肠杆菌经超声破碎后,得到含菌体蛋白和β-G酶的破碎菌液,破碎菌液64℃水浴后得到灭活β-G酶的灭活菌液。在体外牛黄发生器内分别添加不同浓度的大肠杆菌活菌液(活菌组)、破碎菌液(破碎组)和灭活菌液(灭活组)进行成黄试..................共50页

4、酶育牛黄与天然牛黄化学成分的比较研究

牛黄为牛的胆结石,是一种疗效确实的名贵中药材。主要化学成分有胆酸、去氧胆酸、鹅去氧胆酸、胆红素等。具有清热、豁痰、开窍、凉肝、息风、解毒功效。酶育牛黄是以新鲜牛胆汁为原料根据天然牛黄形成原理,采用酶法制备的牛黄。本项目建立了酶育牛黄与天然牛黄的指纹图谱研究方法;对酶育牛黄和天然牛黄中的胆汁酸、胆红素、胆固醇、微量元素等成分进行了系统比较研究。通过系统研究,对酶育牛黄与天然牛黄的一致性进行评价,为酶育牛黄的新药开发和产品质量控制标准提供实验依据和技术资料。课题研究主要内容及结果如下:一、酶育牛黄与天然牛黄中二甲基亚砜提取成分的定性与定量比较研究 建立了酶育牛黄与天然牛黄HPLC指纹图谱,比较了两种牛黄该类成分指纹图谱的异同。10批酶育牛黄的HPLC指纹图谱相似度较高,提示酶育牛黄的生产制备工艺较稳定。但在天然牛黄的10个共有色谱峰中,酶育牛黄..................共82页

5、牛胆汁中CaBP对牛黄成核与核生长的影响

动态观察了牛黄成核及核生长的规律,检测了胆汁中一些主要成分在牛黄形成过程中的变化。向胆汁中添加钙结合蛋白(CaBP),并检测胆汁中相关指标的变化,以探讨钙结合蛋白对牛黄形成的影响。利用牛胆汁驯化大肠杆菌(O8),得到耐胆汁大肠杆菌。驯化后的大肠杆菌其发酵尿素、氨基酸和葡磷栋水产生的生化特性发生变化。将耐胆汁大肠杆菌添加到胆汁中进行牛黄培植,测得牛黄成核时间为3.7±0.2h,牛黄核的最高数量为5535±267个/mm3,且在不同的时间其数量的变化差异极显著(p﹤0.01);牛黄核可视面积达到高峰时为56.8±4.3μm2;总蛋白、Ca~(2+)和总胆红素的浓度均出现先降低后升高而后再降低的变化,且总蛋白和Ca~(2+)的浓度随时间的延长变化显著(p﹤0.05),而总胆红素浓度的变化差异..................共57页

6、牛黄形成机理的实验研究

进行牛体外AG内培植牛黄研究。术后定朋通过肝脏插管获得肝内胆管中的胆汁、通过胆囊引流管获得胆囊胆汁以及采集AG中胆汁;进行胆汁理化性状和主要成分分析、胆汁中细菌的计数以及通过对植黄牛肝脏病理组织学和超微结构的观察来探讨牛黄形成的机理和影响牛黄形成的因素。研究结果表明:1.肝脏、胆囊和AG中胆汁的胆红素含量在术后明显的升高(P<0.01),而后下降到一个平衡状态。在三个部位的胆汁中,其中肝内胆管中胆汁胆红素的含量最高,AG中胆汁胆红素含量最低,两者差异极显著(P<0.01);胆汁胆酸含量术后下降,其中胆囊胆汁中胆酸含量最高,AG中胆汁胆酸含量为最低,两者差异不显著(P>0.05):胆汁粘蛋白的含量升高,其中胆囊胆汁粘蛋白含量最高,AG胆汁粘蛋白含量最低,两者差异极显著(P<0.01);胆汁pH值术后降低,其中AG胆汁的pH值下降极显著(P<0.01),最低达到pH=6.5;胆汁中钙离..................共37页

7、牛磺胆酸钠两种合成方法的比较研究

该文报告了合成牛磺胆酸钠两种方法的实验结果.作者选择了两种无需用氯甲酸乙酯作原料或试剂的邦迪-缪勒法和柯特斯法进行牛磺胆酸钠的合成研究.从工艺条件、产品的纯度和收率方面对两种方法进行了比较.在实验中,对所制备的产物做了mp、TLC、IR、MS、1H-NMR、13C-NMR测试和鉴定;同时我们改进了邦迪-缪勒法的某些操作,着重改进了邦迪-缪勒法中的第三步和第四步的反应条件,使产品纯度和收率有较明显的提高.所研究的邦迪-缪勒法有四步反应,即甲酸化、肼化、叠氮化、取代反应;柯特斯法有三步反应,即甲酰化、酰氯化、缩合反应.主要结论:①邦迪-缪勒法和柯特斯法合成牛磺胆酸钠都能获得目标化合物,但产品收率和纯度有明显的差异;②邦迪-缪勒法较柯特斯法为优,它具有原料易得..................共54页

8、体外培植牛黄形成机理及其药理作用的研究

通过对三头黄牛进行体外模拟胆囊内培植牛黄手术,并从其胆囊中获得引流胆汁,从屠宰场无菌获得屠宰胆汁。利用引流胆汁和屠宰胆汁的混合物在实验室条件下进行育黄。本文通过体外牛黄发生器内成黄实验探讨了不同的反应温度、添加不同浓度的Ca2+、Mg2+、胆红素钠、粘蛋白对体外牛黄及胆汁中胆红素、胆酸、粘蛋白、Ca2+等主要成分含量的影响,结果表明: 温度升高有利于胆红素钙的沉淀, 55℃为成黄最佳反应温度。胆汁在牛黄发生器中反应约20小时后,颜色由反应前的草绿色变为橙黄色,胆汁黏度和PH值呈下降趋势。利用超声波将大肠杆菌(E.coli)菌体打碎,从中获取β-G酶粗制品,在55℃反应条件下,每次用2500毫升胆汁,以40滴/分的速度进行滴流,取得如下实验结果:(1) 向牛黄发生器中加入不同浓度的Ca2+能明显提高胆汁中胆红素的沉淀量(P0.01);以5mg/dlCa2+对游离胆红素(UCB)的沉淀效果最为理想..................共49页

9、牛口服牛黄素形成天然牛黄的方法
10、酶促天然牛黄制备方法
11、一种体外培植牛黄的质量鉴别方法
12、天然牛黄体外培育方法
13、一种化学法工业化生产牛黄的方法
14、酶育牛黄的制备方法
15、一种人造牛黄及其制备方法
16、一种药用仿真牛黄及其制备方法
17、人工牛黄超细粉及制备方法
18、一种生产天然品质牛黄的方法
19、一种人工牛黄包合物、其制备方法及其应用
20、牛黄工厂化生产的方法
21、大直径牛黄珍珠及制备方法
22、人造牛黄的制造方法
23、人工培植牛黄
24、培养天然牛黄的生产工艺
25、人工培养牛黄与取胆汁新方法
26、一种人工培育牛黄的方法
27、一种培养牛黄的生产工艺
28、新牛黄的制造方法

29、用牛体培植牛黄的手术
30、不同浓度Ca2+Mg2+在培植牛黄形成过程中的作用
31、胆红素钠在体外培植牛黄形成过程中作用的研究
32、离体培植牛黄技术及成黄机理的研究
33、利用肉牛培植牛黄的技术措施
34、利用肉牛培植牛黄实验
35、南阳黄牛人培牛黄技术试验报告
36、牛黄的人工培植技术
37、牛体外牛黄发生器内培植牛黄技术研究
38、人工培育牛黄的手术方法
39、人工培植牛黄的试验
40、人工培植牛黄的试验技术
41、体外培育牛黄的研制及临床
42、体外培育牛黄的药学研究
43、体外培育牛黄研究概况
44、温度对体外培植牛黄影响的研究


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