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谷氨酰胺转胺酶、转谷氨酰胺酶、TG酶制备技术应用专利文献资料


1、产微生物谷氨酰胺转胺酶菌株的筛选及酶性质研究

谷氨酰胺转胺酶(蛋白质-谷氨酸-γ谷氨酰胺转移酶,Transglutaminase EC2.3.2.13,TG)由于能催化蛋白质分子内或分子间的酰基转移反应,通过形成交联键改善蛋白质的功能性质,在食品工业中具有广泛的应用潜力。微生物发酵法生产TG由于不受季节的限制,分离纯化过程简单,反应速率快,底物特异性低等特点,更适于广泛应用。本文介绍了TG的来源、结构和性质、作用机理和功能、应用和生产的现状与研究进展,重点进行了产谷氨酰胺转胺酶菌株的筛选、发酵条件的优化及酶的稳定性、酶促反应动力学曲线等方面的研究。通过大量采取土壤分离培养,利用凝胶法初测,比色法精测,分离得到一株产MTG(Microbial Transglutaminase)的菌株,找到了一个简便、低廉、快速的筛选技术...............共56页

2、谷氨酰胺转胺酶发酵中试、提取纯化及初步应用研究

通过对WJS-825菌株产谷氨酰胺转胺酶的摇瓶发酵条件进行单因素及五因子二次正交旋转回归设计实验,建立了谷氨酰胺转胺酶发酵过程中以酶活和细胞生长量为目标函数的数学模型,以此模型对WJS-825菌株发酵生产TGase的培养条件进行优化,得到该菌株摇瓶发酵生产TGase的最适条件为:多价胨2.1%,可溶性淀粉2.1%,MgSO4·7H2O0.1%,K2HPO40.2%,Na2HPO40.3%,聚甘油醚(消泡剂)0.3%,pH7.0,温度30.8℃,接种量10%,种龄48小时,250mL摇瓶装液量40mL,摇瓶转速200r/min.罐上发酵最适条件如下:5L——200L罐上在线分段控制温度及pH(前20h:温度32℃,pH7.2;20h以后:温度30.8℃,pH7.0),接种量10%,装液量70%,通气量和搅拌转速分别控制为0.8—1.1v/vm,200—400r/min.以此条件进行发...............共60页

3、谷氨酰胺转胺酶高产菌株的选育及其酶学性质的研究

谷氨酰胺转胺酶是一种新型的酶制剂,能够催化体外多种蛋白质之间、蛋白质和氨基酸之间的交联反应,使蛋白质改性,提高蛋白质的功能性和营养价值。因此,在食品加工领域里具有多种重要的用途。国外对该酶的研究较早,而且产品已投入市场。在国内,利用微生物发酵法生产谷氨酰胺转胺酶的历史较短,主要是摇瓶发酵条件的摸索与分析,且多为实验室小试水平。有关酶的分离纯化等下游技术及酶学性质等方面的研究报道,多限于对国外资料的综述。因此对谷氨酰胺转胺酶的研究显得尤为重要。本文主要从以下四个方面进行研究:1.谷氨酰胺转胺酶高产菌株的选育。通过紫外线和He-Ne激光对其孢子进行复合诱变,以谷氨酰胺转胺酶活力为指标,筛选获得高产菌株...............共54页

4、谷氨酰胺转胺酶生产菌种的选育和其基因的表达

以获得谷氨酰转胺酶高产菌株为目标,通过对茂原链霉菌紫外诱变来选育高产菌株,并对产谷氨酰胺转胺酶发酵培养基和发酵条件进行了优化,初步研究了利用基因工程手段构建基因工程菌生产谷氨酰胺转胺酶。将购买的菌株活化后,通过自然选育获得一株产酶能力为0.66 U/ml的原始菌株,并对该菌株孢子进行紫外线处理,经诱变筛选得到一株相对高产稳定的菌株,产酶能力达到0.88 U/ml,比原始菌株提高了33%。以筛选得到的高产菌株为出发菌株,通过单因素和正交试验确定了产谷氨酰胺转胺酶培养基的最佳碳氮源组成为:淀粉25g/L,葡萄糖20g/L,蛋白胨15g/L黄豆饼粉30g/L,最佳培养条件为:以48h种龄的液体种子按8%的量接种,初始pH为7.0,培养温度为28℃,摇床转速为200rpm,培养时间为4...............共48页

5、谷氨酰胺转胺酶在鲢鱼糜中的应用及机理研究

谷氨酰胺转胺酶(TGase)是一种转移酶,它能够促使酰基发生转移反应的,催化蛋白质分子内和分子间的ε-(γ-谷酰胺)-赖氨酸形成异型肽键,使肌球蛋白分子之间产生交联,从而提高肌球蛋白的凝胶性能,而凝胶性能(略)一个重要指标,因此对TGase如何影响鲢鱼鱼糜制品的凝胶性能进行了研究. 本论文分析了鲢鱼鱼肉的营养成分,研究了不同(略)鱼鱼糜品质的影响及谷氨酰胺转胺酶对鲢鱼鱼糜凝胶性能的作用效果(略)工艺,分析了凝胶形成过程中的物理化学变化,并对纯鱼糜和添加了TGase的鱼糜制品进行了贮藏实验. 研究不同加热方式对鲢鱼鱼糜品质的影响,试验结果表明:两段加热法比一段加热法能明显提高鲢鱼糜凝胶强度.通过对在35℃、40℃、45℃这些不同加热温度下分别处理30min、60mi................共64页

6、离子束诱变谷氨酰胺转胺酶高产菌株选育

通过对实验室保藏菌种茂原链轮丝菌(Streptoverticillium mobaraense)K21的离子束诱变,筛选出了产谷氨酰胺转胺酶高产茂原链丝菌S2菌株,谷氨酰氨转氨酶由原来的2.3U/mL达到3.6U/mL,高于出发菌珠56.52%。经过7代遗传稳定性实验结果表明,连续传7代,S2菌株产酶活力变化范围在94%-103%之间,具有良好的遗传稳定性。建立了一套以酪蛋白絮凝性沉淀为检测指标的新的初筛方法,并以之为初筛手段,筛选到了S2菌株,证明该方法是一种行之有效的新方法。通过对8个剂量,能量30KeV,N~+离子束诱变效果的考察,寻找出5×10~(16)ions/cm~2是K21菌株的最佳诱变剂量。经过培养条件优化的正交实验,发现诱变后的S2菌株最佳培养条件为初始pH6.0,培养温度33℃,K_2HPO_4 0.2%,酵母膏0.1%,MgSO_4...............共48页

7、轮枝链霉菌产谷氨酰胺转胺酶生物合成研究

谷氨酰胺转胺酶(TGase)是一种催化酰基转移反应的转移酶,它可催化蛋白质分子内和分子间ε-(γ-谷酰胺)-赖氨酸的异型肽键的形成,改善食品的品质,目前已广泛应用于食品工业中,但是成本过高的问题严重制约了TGase的使用和推广。本文以轮枝链霉菌SK4.001为出发菌株,研究了以豆饼粉酶解液作为培养基氮源对TGase酶活的影响。实验发现,胰蛋白酶是水解豆饼粉较好的酶。发酵培养基中酶解液添加量为100%。在胰蛋白酶水解豆饼粉单因素实验的基础上,采用正交实验进行优化。优化后的最佳酶解条件为温度35℃, pH 8.5,豆饼粉浓度10%,加酶量1000U/g底物。按此条件进行酶解,所获得的酶解物作为轮枝链霉菌产TGase发酵培养基的氮源,发酵42h后,酶活达到最高为5.04U/mL。因此,豆饼粉酶...............共60页

8、轮枝链霉菌谷氨酰胺转胺酶的性质研究及在面包中的应用

谷氨酰胺转胺酶(TGase)是一种催化酰基转移反应的转移酶,它可催化蛋白质分子内和分子间ε-(γ-谷酰胺)-赖氨酸的异型肽键的形成,改善食品的品质,目前已广泛应用于食品工业中,本文主要对轮枝链霉菌SK4.001产生的谷氨酰胺转胺酶进行了研究。本文采用Fractogel EMD SO_3~-离子交换层析和Superdex 75 (10/300GL)凝胶过滤等分离纯化方法,使轮枝链霉菌SK4.001产生的谷氨酰胺转胺酶(TGase)得到较好分离。通过SDS-PAGE电泳检测纯度,得到一条单一区带,TGase的相对分子量约为40.4 kDa。其次研究了纯化后TGase的酶学性质:TGase最适反应温度和pH分别为50℃和7.0,该酶温度稳定范围为20-40℃,pH稳定范围为5.6-7.0;Na~+, K~+, Ca~(2+), Mg~(2+), Ba~(2+)不会抑制酶的活性,Zn~(2+), Fe...............共73页

9、生物转化谷氨酰胺转胺酶和腺苷甲硫氨酸的生产工艺研究

主要探讨了微生物谷氨酰胺转胺酶(MTG)在300L发酵罐上的工艺条件,同时对MTG分离的关键步骤进行了研究。主要研究结果如下: ⑴Streptoverticillium mobaraense生产MTG发酵过程中pH控制策略为:通过在24h以后流加一定适合种类的有机酸来调控pH,使该值控制在6.0~6.8:通过加入离子捕捉剂,改变造成发酵pH变化的一些关键盐离子浓度;建立发酵体系中MTG酶的专一性非抑制体系,阻断MTG的自身产生的一些酶反应。⑵发酵原材料的从工业化成本考虑以葡萄糖为主,适当补加甘油或淀粉水解物等是比较理想的碳源组合。高压水解的豆饼粉为氮源比较理想,豆饼粉水解物的最适添加浓度为25g\L,,其与对照组比MTG酶活高出26.2%,其次鱼粉水解物也是比较适宜MTG合成的氮源...............共66页

10、通过发酵策略及诱变选育来提高谷氨酰胺转胺酶酶活

微生物谷氨酰胺转胺酶(Microbial Transglutaminase,简称MTG,EC 2.3.2.13)能催化多种蛋白质分子间、分子内的酰基转移反应,改善各种蛋白质的功能性质,在食品、化妆品、制药等工业领域具有广阔的应用前景。本研究以提高吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus)WSH03-13发酵产谷氨酰胺转胺酶的产量为目标,分别研究了吸水链霉菌的高密度培养和溶氧浓度对发酵过程的影响并通过不同的诱变手段来筛选高酶活的菌株。主要内容如下:1.对吸水链霉菌的高密度培养进行了研究。通过考察不同初始葡萄糖浓度下的分批发酵,确定了最佳初始葡萄糖浓度为10 g/L。通过比较了不同的流加速率,确定在8-16 h采用较高的的比生长速率(0.15 h-1),后期降低比生长速率(0.10 h-1)这种较优的葡萄糖...............共68页

11、微生物谷氨酰胺转胺酶(MTG)发酵中试条件优化的研究

在本文中,以10升生物反应器为研究基础,对影响微生物谷氨酰胺转胺酶(MTG)合成的操作条件如搅拌和转速以及发酵条件的影响因子如溶解氧和pH值进行一定的研究,在此研究基础上进行了初步的葡萄糖补料和放大实验研究,最后根据本实验室的发酵体系,在优化好的条件基础上建立了一个包括三个数学方程的MTG分批发酵的动力学模型,其主要结果如下:1.在摇瓶的基础上,用不同培养基来研究MTG分批发酵的动力学关系,研究表明,MTG分批发酵中细胞生长与产物合成是一种偶联与非偶联的复合模型,产物合成与底物(碳源)消耗是一种直接利用的关系,为进一步的实验研究提供了一定的理论参考。2.在10升的生物反应器上,对搅拌转速和通气量进行了一定的研究,在本文中350rpm的搅拌转速对细胞生长和产...............共56页

12、微生物谷氨酰胺转胺酶发酵培养基的优化

微生物谷氨酰胺转胺酶能催化蛋白质分子内或蛋白质分子间的交联,从而改变各种蛋白质的功能性质,在食品、化妆品、制药等工业领域具有广阔的应用前景。研究微生物发酵法生产谷氨酰胺转胺酶的历史较短,还存在多方面的问题,如菌种易退化、菌株产酶低、酶活不稳定等等。解决这些问题的方法包括筛选高产的菌种,选择适宜的培养基成分,优化微生物谷氨酰胺转胺酶发酵生产的各种培养条件,找出影响微生物合成谷氨酰胺转胺酶的关键因素等,以提高发酵水平,奠定微生物谷氨酰胺转胺酶的工业化生产基础。本文以实验室保藏的链霉菌Streptomyces sp.HS-1为出发菌株,以提高酶活为主要研究目标,以摇瓶发酵为主,主要研究的内容有:第一,以链霉菌HS-1为出发

13、微生物谷氨酰胺转胺酶发酵条件的优化
14、微生物谷氨酰胺转胺酶分离提取及稳定性研究
15、微生物谷氨酰胺转胺酶分批补料发酵及动力学模型的研究
16、吸水链霉菌发酵法生产谷氨酰胺转胺酶过程中蛋白酶的产生及控制研究
17、吸水链霉菌谷氨酰胺转氨酶的活化机理研究
18、吸水链霉菌谷氨酰胺转胺酶的活化机制和生理功能
19、转谷氨酰胺酶对PSE猪肉的处理效果及机理
20、转谷氨酰胺酶对草鱼糜凝胶性的影响
21、转谷氨酰胺酶对大豆蛋白表面疏水性及粘度的影响
22、转谷氨酰胺酶以及非肉蛋白在肉类加工中的应用研究
23、转谷氨酰胺酶在凝固型酸奶中的应用研究
24、转谷氨酰胺酶在乳蛋白间的交联机理及应用研究
25、00111967.2 一种新的多肽——人转谷氨酰胺酶12和编码这种多肽的多核苷酸 33
26、00115542.3 一种新的多肽——人含转谷氨酰胺酶活性位点的蛋白9和编码这种多肽的多核苷酸 34
27、00121640.6 包括用转谷氨酰胺酶处理谷物粉物料的糖的生产方法 12
28、00127153.9 一种新的多肽——人转谷氨酰胺酶10.23和编码这种多肽的多核苷酸 33
29、00813733.1 转谷氨酰胺酶的制备方法 96
30、00814437.0 源自微生物的转谷氨酰胺酶的制备方法 31
31、01127453.0 利用转谷氨酰胺酶制备海洋风味蛋白凝胶的工艺 7
32、01143722.7 拉达卡链轮丝菌的转谷氨酰胺酶基因及其编码的转谷氨酰胺酶 25
33、01817513.9 来源于微生物的转谷氨酰胺酶的修饰方法 113
34、02148526.7 一种从谷氨酰胺转胺酶发酵液中提取谷氨酰胺转胺酶的方法 6
35、03152912.7 一种提高轮枝链霉菌产转谷氨酰胺酶活力的方法 7
36、03152956.9 一种谷氨酰胺转胺酶高产菌及其筛选方法和用该菌株发酵法生产谷氨酰胺转胺酶 5
37、03817552.5 编码具有转谷氨酰胺酶活性的蛋白质的玉米核苷酸序列及其应用 33
38、03821516.0 转谷氨酰胺酶生产菌 35
39、93117381.7 由酶促反应制备的二聚IL-2以及用于制备该IL-2的源于神经的转谷氨酰胺酶 49
40、96105596.0 杆菌衍生的转谷氨酰胺酶 64
41、96194644. 血纤维蛋白交联和 或转谷氨酰胺酶的抑制剂 28
42、96195878.2 用微生物生产转谷氨酰胺酶的方法 34
43、97196526.9 检测针对组织转谷氨酰胺酶(tTG)的抗体的免疫方法,tTG在诊断和治疗控制中的用途,和含tTG的口服药剂 22
44、98103375. 生产微生物转谷氨酰胺酶的方法 56
45、99125771.5 一种新的多肽——转谷氨酰胺酶9和编码这种多肽的多核苷酸 30
46、99127208.0 一种新的多肽--转谷氨酰胺酶10和编码这种多肽的多核苷酸 31
47、99816257.4 转谷氨酰胺酶的制备方法 64
48、200310106373.9 添加谷氨酰胺转胺酶改善鱼糜制品凝胶性能的方法 5
49、200310106516.6 一种用谷氨酰胺转胺酶处理羊毛织物的方法 6
50、200410041693.5 一种添加羟胺提高发酵法制备谷氨酰胺转胺酶产量的方法 5
51、200410059598.8 转谷氨酰胺酶大豆蛋白鱼和肉制品及其类似物 22
52、200480006224.8 微生物转谷氨酰胺酶的生产方法 39
53、200480021108.3 利用转谷氨酰胺酶形成新的促红细胞生成素缀合物 43
54、200510014476.1 一种谷氨酰胺转胺酶的制备方法 10
55、200510037937.7 一种从谷氨酰胺转胺酶发酵液中制备固体酶制剂的方法 7
56、200510039231.4 一种含有转谷氨酰胺酶的多层次冷冻酥性面团及其生产方法 7
57、200510040489.6 一种抑制谷氨酰胺转胺酶发酵法制酶制剂中蛋白酶的方法 5
58、200580002897.0 转谷氨酰胺酶介导的肽的接合 105
59、200610097160.8 添加胰蛋白酶提高发酵法制备谷氨酰胺转胺酶产量的方法 5
60、200610097161.2 添加十六烷基三甲基溴化铵提高谷氨酰胺转胺酶产量的方法 5
61、200680011298. 抑制转谷氨酰胺酶的肽 31
62、200680011298. 抑制转谷氨酰胺酶的肽 31
63、200680029853.1 转谷氨酰胺酶介导的生长激素的结合 198
64、200680030084.7 改进转谷氨酰胺酶的底物特异性 32
65、200680031188. 测定含转谷氨酰胺酶制品的蛋白酶活性的方法和粘结用转谷氨酰胺酶制剂 31
66、200680031211.5 制备蛋白酶活性降低的含转谷氨酰胺酶制品的方法 23
67、200680038433. 特异性改进的转谷氨酰胺酶变异体 56
68、200710023721.4 一种谷氨酰胺转胺酶激活蛋白酶抑制因子的分离纯化方法 6
69、200710023771.2 一种吸水链霉菌的谷氨酰胺转胺酶酶原基因及其表达 13
70、200710171625.4 用转谷氨酰胺酶提高羊毛色织物颜色深度的增深洗涤方法 5
71、200780030775.1 具有提高的特异性的转谷氨酰胺酶变异体 69
72、200780041331.8 作为转谷氨酰胺酶抑制剂的迈克尔系统 188
73、200780051215.4 明胶-转谷氨酰胺酶止血敷料和密封材料 75
74、200810047588.O 谷氨酰胺转胺酶的用途 8
75、200810122426.9 一种利用谷氨酰胺转胺酶催化外源蛋白整理羊毛织物的方法 5
76、200810220160.1 大肠杆菌及其可溶性表达转谷氨酰胺酶酶原的方法 11
77、200810243014.0 一种转谷氨酰胺酶增强高纤维蔬菜纸型食品胶粘性的方法 6
78、200880005200.9 引入二硫键的转谷氨酰胺酶 41
79、200880005249.4 特异性提高的转谷氨酰胺酶变体 67
80、200880019859. 包含EGCG的转谷氨酰胺酶抑制剂及其生产方法 15
81、200880019884.8 包含绿原酸的转谷氨酰胺酶抑制剂及其生产方法 11
82、200910013072.9 补料发酵法生产谷氨酰胺转胺酶 4
83、2009100195372.3 一种应用谷氨酰胺转胺酶的不漂洗鱼糜的制备方法 7
84、200910027249.0 一种利用转谷氨酰胺酶提高冷冻燕麦面团粘弹特性的方法 8
85、200910029198.5 一种转谷氨酰胺酶提高冷冻发酵油条酥脆性的方法 6
86、200910031549.6 一种利用谷氨酰胺转胺酶催化溶菌酶固定化对羊毛织物进行抗菌整理的方法 6
87、200910031550.9 一种利用谷氨酰胺转胺酶提高羊毛织物天然染料染色性能的方法 5
88、200910091763.0 表达谷氨酰胺转胺酶的重组菌及其应用 12
89、200910309438.7 微生物转谷氨酰胺酶改性的豆粉基木材胶粘剂及其制备方法 7
90、200980104645.7 稳定型转谷氨酰胺酶及其制造法 21
91、200980124151.5 干燥转谷氨酰胺酶组合物 25
92、201010145115.1 一种茂原链轮丝菌谷氨酰胺转胺酶的表达方法及其专用工程菌 12
93、201010211057.8 一种谷氨酰胺转胺酶编码基因阻断吸水链霉菌及其应用 12
94、201010579755.3 一种产谷氨酰胺转胺酶活化蛋白酶抑制剂的基因工程菌及其构建方法 11
95、201010580955.0 一种谷氨酰胺转胺酶的分离纯化方法 8
96、201010581546.2 一种分泌谷氨酰胺转胺酶酶原的大肠杆菌及其应用 8
97、201010582053.0 一种新型谷氨酰胺转胺酶及其应用 7
98、201080010744.1 放线菌来源的耐热性转谷氨酰胺酶 56
99、201110034437.3 一种分离纯化谷氨酰胺转胺酶的方法 6
100、201110081732.4 黄瓜发酵液与谷氨酰胺转胺酶复合凝固剂加工豆腐的方法 6
101、201110365186.7 明胶-转谷氨酰胺酶止血敷料和密封材料 73
102、201110371080.8 一种提高谷氨酰胺转胺酶热稳定性的方法 6
103、201110423203.8 一种利用转谷氨酰胺酶提高冷冻糯麦面团粘弹特性的方法 6
104、201110452678. 一种谷氨酰胺转胺酶真空干燥的制备方法 11
105、201110455774. 一种提高茂原链轮丝菌谷氨酰胺转胺酶表达量的方法及其专用工程菌 17
106、201210029597.3 利用转谷氨酰胺酶酶原生产微生物转谷氨酰胺酶的方法 17
107、201210034340.7 一种高效分泌谷氨酰胺转胺酶的变铅青链霉菌及其应用 9
108、201210035336.2 一种高效发酵生产谷氨酰胺转胺酶酶原的方法 6
109、201210052578.2 一株重组的枯草芽孢杆菌及由其生产转谷氨酰胺酶的方法 15
110、201210145188. 一种优化的谷氨酰胺转胺酶启动子及其应用 9
111、201210202170.9 一种微生物谷氨酰胺转胺酶及其应用 20
112、201210585268.7 一种抑制枯草芽孢杆菌谷氨酰胺转胺酶活性的多肽及其筛选方法和应用 13
113、201310086499.8 转谷氨酰胺酶介导的肽的接合 74
114、201310226603.9 一种高效表达谷氨酰胺转胺酶的基因工程菌及其应用 8



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